注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無(wú)顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果。
     染色后宜盡快檢測(cè)，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過(guò)程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細(xì)胞，并且通過(guò)調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無(wú)法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)，這樣通?？梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
產(chǎn)品名稱(chēng)：黑色素瘤細(xì)胞
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：VMM5A細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X969946
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。
實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺(tái)；

臺(tái)盼藍(lán)染色液(1%)Andrographolide；穿心蓮內(nèi)酯HHV6-A（HUMAN HERPESVIRUS 6-A）病定性檢測(cè)試劑盒

中性紅染色液(0.5%)Angelicin；異補(bǔ)骨脂素HHV6-B（HUMAN HERPESVIRUS 6-B）病定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒

中性紅染色液(1%)Angelicin；異補(bǔ)骨脂素HHV6-B（HUMAN HERPESVIRUS 6-B）病定性檢測(cè)試劑盒

中性紅乙染色液(0.1%)Angelicin；異補(bǔ)骨脂素HPV6（HUMAN PAPILLOMAVIRUS-6）病定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒

中性紅染色液(活)Angiotensin II human；血管緊張素ⅡHPV6（HUMAN PAPILLOMAVIRUS-6）病定性檢測(cè)試劑盒

橘黃G6染色液Angiotensin II human；血管緊張素ⅡHPV7（HUMAN PAPILLOMAVIRUS-7）病定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒

橘黃G6染色液Angiotensin II human；血管緊張素ⅡHPV7（HUMAN PAPILLOMAVIRUS-7）病定性檢測(cè)試劑盒

EA50染色液Antipyrine；安替比林HSV（HERPES SIMPLX）病定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒

EA50染色液Antipyrine；安替比林HSV（HERPES SIMPLX）病定性檢測(cè)試劑盒

巴氏染色液(Papanicolaou EA50)Antipyrine；安替比林HSV1（HERPES SIMPLX1）病定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒

巴氏染色液(Papanicolaou EA50)Antipyrine；安替比林HSV1（HERPES SIMPLX1）病定性檢測(cè)試劑盒

EA36染色液Apigenin；芹菜素HSV2（HERPES SIMPLX2）病定量PCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒

EA36染色液Apigenin；芹菜素HSV2（HERPES SIMPLX2）病定性檢測(cè)試劑盒

巴氏染色液(Papanicolaou EA36)Apigenin；芹菜素IGF-1R激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）

巴氏染色液(Papanicolaou EA36)Apigenin；芹菜素II型L－3羥?；瑿oA 脫氫酶/β淀粉樣蛋白結(jié)合乙脫氫酶（HADHII/ABAD）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
VMM5A細(xì)胞心肌肌鈣蛋白T(c/TNNT2)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  Human SLC24A6 ELISA Kit同源盒蛋白B8抗體

性別決定區(qū)Y框蛋白2(SOX2)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human SLC24A4 ELISA Kit熱休克蛋白70家族蛋白6抗體

膽堿乙酰化酶(CHAc)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒  Human CD3d(Cluster of Differentiation 3d) ELISA Kit肝生長(zhǎng)因子激活蛋白抗體

黑素瘤衍生亮氨酸拉鏈額外核因子(MLZE)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒Human SLC22A2 ELISA Kit肝癌衍生生長(zhǎng)因子抗體（高遷移率族蛋白1樣蛋白2抗體）

錨蛋白重復(fù)域1(ANKRD1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human SLC25A1 ELISA Kit磷酸化組蛋白H3抗體

XI型膠原α1(COL11α1)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human SLC1A4 ELISA Kit核糖基轉(zhuǎn)移酶1抗體

視網(wǎng)膜母瘤抑制蛋白(PRB)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒 Human SLC25A11 ELISA Kit乙?；M蛋白H3抗體